IMM

FMO kontroly

fluorescence Minus jedna (FMO) kontroly jsou vzorky obarvené všemi fluorofory ve vašem panelu, mínus jeden z nich. Používají se k nastavení horní hranice pro signál pozadí na vynechaném štítku, a tím k identifikaci a bráně pozitivních populací v vícebarevných experimentech. Fmo jsou rozhodující, pokud pozitiva nejsou jasně oddělena od negativů kvůli nízké nebo variabilní úrovni exprese(populace je tlumená nebo rozmazaná). Obecně se doporučuje zahrnout FMOs pro každý marker při testování a optimalizaci nového vícebarevného panelu protilátek. Jakmile panel je řádně validovány, některé z FMOs může být upuštěno, a to pouze ty, pro těžké brány populace jsou následně spustit s každou dávkou plně barevné vzorky.

FMOs jsou přesnější vstupní kontroly, než neposkvrněný nebo jednotlivé barevné vzorky, protože berou v úvahu rozšíření negativní populace v důsledku přelévání šíření (viz kompenzace kontroly). FMOs však nekontrolují nespecifickou vazbu protilátek (viz Fc blok a titrace Ab) nebo nezanedbatelnou úroveň bazální exprese(viz biologické kontroly). Důležitější je, FMO ovládací prvky jsou ovlivněny oba autofluorescence a sekundární marker úrovních exprese v buňkách, a proto musí být stejný typ buněk, než experimentální vzorky a nemůže být nahrazen např. korálky nebo irelevantní buněčné linie.

FMO

Obr. 1. PE negativní populace vykazují zvýšené šíření dat v vícebarevném panelu a vyžadují kontrolu FMO pro přesné bránění pozitivních populací.

Doplňující Informace:
  • Bio-Rad průtoková Cytometrie základní Příručka: Fluorescenční Minus Jeden Ovládací prvky
  • KFM článek na BiteSizeBio

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna. Vyžadované informace jsou označeny *