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Controles FMO

Los controles de fluorescencia Menos Uno (FMO) son muestras teñidas con todos los fluoróforos de su panel, menos uno de ellos. Se utilizan para establecer el límite superior de la señal de fondo en la etiqueta omitida, y por lo tanto para identificar y eliminar poblaciones positivas en experimentos multicolores. Los FMO son cruciales cuando los positivos no están claramente separados de los negativos debido a un nivel de expresión bajo o variable (la población es débil o un frotis). Por lo general, se recomienda incluir FMO para cada marcador al probar y optimizar un nuevo panel de anticuerpos multicolor. Una vez que el panel esté debidamente validado, algunos de los FMO pueden ser eliminados y solo los de poblaciones difíciles de compuerta se ejecutan posteriormente con cada lote de muestras completamente teñidas.

Los FMO son controles de compuerta más precisos que las muestras sin teñir o con un solo color porque tienen en cuenta la ampliación de las poblaciones negativas debido a la propagación de derrame (ver controles de compensación). Sin embargo, los OMF no controlan la unión inespecífica de anticuerpos (ver bloque Fc y valoración Ab) ni el nivel de expresión basal no despreciable (ver controles biológicos). Es importante destacar que los controles FMO se ven afectados tanto por la autofluorescencia como por los niveles de expresión de marcadores secundarios en las células y, por lo tanto, deben ser del mismo tipo de células que las muestras experimentales y no pueden sustituirse por, por ejemplo, perlas o una línea celular irrelevante.

FMO

Fig. 1. Las poblaciones negativas de PE muestran un aumento de la propagación de datos en paneles multicolores y requieren un control FMO para la activación precisa de las poblaciones positivas.

Información adicional:
  • Guía Básica de Citometría de Flujo Bio-Rad: Controles Fluorescentes Menos Uno
  • Artículo de FMO en BiteSizeBio

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