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Contrôles FMO

Les contrôles de fluorescence Moins Un (FMO) sont des échantillons colorés avec tous les fluorophores de votre panneau, moins l’un d’entre eux. Ils sont utilisés pour définir la limite supérieure du signal de fond sur l’étiquette omise, et ainsi identifier et sélectionner des populations positives dans des expériences multicolores. Les OMF sont cruciales lorsque les positifs ne sont pas clairement séparés des négatifs en raison d’un niveau d’expression faible ou variable (population faible ou frottis). Il est généralement recommandé d’inclure des FMOS pour chaque marqueur lors du test et de l’optimisation d’un nouveau panneau d’anticorps multicolores. Une fois que le panneau est correctement validé, une partie des OMF peut être abandonnée et seuls ceux des populations difficiles à contrôler sont ensuite exécutés avec chaque lot d’échantillons entièrement colorés.

Les OMF sont des contrôles de déclenchement plus précis que les échantillons non colorés ou à coloration unique, car ils tiennent compte de l’élargissement des populations négatives dû à la propagation par débordement (voir contrôles de compensation). Les OMF ne contrôlent cependant pas la liaison non spécifique des anticorps (voir bloc Fc et titrage Ab) ni le niveau d’expression basale non négligeable (voir contrôles biologiques). Fait important, les contrôles FMO sont affectés à la fois par l’autofluorescence et les niveaux d’expression des marqueurs secondaires dans les cellules et doivent donc être du même type de cellules que les échantillons expérimentaux et ne peuvent pas être substitués par exemple par des perles ou une lignée cellulaire non pertinente.

FMO

Fig. 1. Les populations négatives de PE montrent une propagation accrue des données dans le panneau multicolore et nécessitent un contrôle FMO pour une synchronisation précise des populations positives.

Informations supplémentaires:
  • Guide de base de la cytométrie en flux Bio-Rad: Contrôles fluorescents Moins Un
  • Article du FMO chez BiteSizeBio

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