IMM

FMO Controls

fluoreszcencia Minus One (FMO)controls olyan minták, amelyek a panelen lévő összes fluoroforral vannak festve, mínusz egyikük. Ezeket arra használják, hogy beállítsák a háttérjel felső határát a kihagyott címkén, így a pozitív populációk azonosítására és kapujára Többszínű kísérletekben. Az FMOs döntő fontosságú, ha a pozitívokat nem választják el egyértelműen a negatívoktól az alacsony vagy változó kifejezési szint miatt (a populáció homályos vagy kenet). Az új többszínű antitest panel tesztelésekor és optimalizálásakor általában ajánlott minden egyes jelölőhöz FMOs-t felvenni. Miután a panelt megfelelően validálták, néhány FMOs-t le lehet dobni, és csak azokat, amelyek nehezen kaphatók, ezt követően minden egyes tétel teljesen festett mintával futnak.

az FMOs pontosabb kapuzási kontrollok, mint a nem láncolt vagy egyetlen foltos minta, mivel figyelembe veszik a negatív populációk kiszélesedését a kiömlés terjedése miatt (lásd kompenzációs ellenőrzések). Az FMOs azonban nem szabályozza a nem specifikus antitestkötődést (lásd Fc block és Ab titrálás) vagy a nem elhanyagolható bazális expressziós szintet (lásd biológiai kontrollok). Fontos, hogy az FMO-kontrollokat mind az autofluoreszcencia, mind a sejtek másodlagos marker expressziós szintje befolyásolja, ezért ugyanolyan típusú sejteknek kell lenniük, mint a kísérleti minták, és nem helyettesíthetők pl. gyöngyökkel vagy irreleváns sejtvonallal.

FMO

ábra. 1. PE negatív populációk azt mutatják, hogy a többszínű panelen megnövekedett az adatok terjedése, és FMO-vezérlést igényelnek a pozitív populációk pontos befogásához.

további információk:
  • Bio-Rad áramlási citometria alapismeretek útmutató: fluoreszkáló mínusz egy kontroll
  • FMO cikk a BiteSizeBio

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé. A kötelező mezőket * karakterrel jelöltük