IMM

Fmo Kontroller

Fluorescens Minus En (FMO) kontroller er prøver farget med alle fluoroforer i panelet, minus en av dem. De brukes til å sette den øvre grensen for bakgrunnssignal på den utelatte etiketten, og dermed identifisere og gate positive populasjoner i flerfarget eksperimenter. FMOs er avgjørende når positive ikke er klart skilt fra negative på grunn av lavt eller variabelt uttrykksnivå(populasjonen er svak eller en smøre). Det anbefales generelt å inkludere FMOs for hver markør når du tester og optimaliserer et nytt flerfarget antistoffpanel. Når panelet er riktig validert, kan noen Av Fmoene bli droppet, og bare de som er vanskelige å gate-populasjoner, kjøres deretter med hver gruppe fullfargede prøver.

FMOs er mer nøyaktige gating kontroller enn unstained eller enkelt farget prøver fordi de tar hensyn til utvidelse av negative populasjoner på grunn av spillover spredning (se kompensasjonskontroller). FMOs kontrollerer imidlertid ikke uspesifikk antistoffbinding (Se Fc-blokk og ab-titrering) eller ikke-ubetydelig basal ekspresjonsnivå (se biologiske kontroller). Det er viktig AT fmo-kontroller påvirkes av både autofluorescens og sekundære markøruttrykksnivåer i cellene og derfor må være samme type celler enn de eksperimentelle prøvene og kan ikke erstattes av f.eks. perler eller en irrelevant cellelinje.

FMO

Fig. 1. PE negative populasjoner viser økt data spredning i flerfarget panel og krever EN FMO kontroll for nøyaktig gating av positive populasjoner.

Tilleggsinformasjon:
  • Bio-Rad Flow Cytometry Grunnleggende Guide: Fluorescerende Minus En Kontroller
  • fmo artikkel På BiteSizeBio

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert. Obligatoriske felt er merket med *