IMM

FMO Controls

fluorescentie Minus één (FMO) controls zijn monsters gekleurd met alle fluoroforen in uw paneel, minus één van hen. Ze worden gebruikt om de bovengrens voor achtergrondsignaal op het weggelaten label in te stellen, en dus om positieve populaties in multicolor experimenten te identificeren en te poortten. FMO ‘ s zijn cruciaal wanneer de positieven niet duidelijk gescheiden zijn van de negatieven vanwege een laag of variabel expressieniveau (populatie is zwak of een uitstrijkje). Het wordt over het algemeen aanbevolen om FMOs voor elke teller op te nemen bij het testen en optimaliseren van een nieuw multicolor antilichaampaneel. Zodra het paneel goed is gevalideerd, kunnen sommige FMO ‘ s worden verwijderd en alleen die voor moeilijk te poortspopulaties worden vervolgens uitgevoerd met elke partij volledig gekleurde monsters.

FMO ‘ s zijn nauwkeuriger gating controles dan niet-bevlekte of enkele bevlekte monsters, omdat zij rekening houden met de toename van negatieve populaties als gevolg van spill-over spread (zie compensation controls). FMO ‘ s controleren echter niet op niet-specifieke antilichaambinding (zie Fc-blok-en Ab-titratie) of niet-verwaarloosbaar basaal expressieniveau (zie biologische controles). Belangrijk is dat FMO controles worden beïnvloed door zowel de autofluorescentie en de secundaire marker expressie niveaus in de cellen en daarom moeten hetzelfde type cellen dan de experimentele monsters en kan niet worden vervangen door bijvoorbeeld parels of een irrelevante cellijn.

FMO

Fig. 1. PE negatieve populaties tonen een verhoogde verspreiding van gegevens in multicolor paneel en vereisen een FMO controle voor nauwkeurige gating van positieve populaties.

aanvullende informatie:
  • Bio-Rad Flow Cytometry Basics Guide: Fluorescent Minus One Controls
  • FMO article at BiteSizeBio

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd. Vereiste velden zijn gemarkeerd met *