IMM

FMO Controls

Fluorescence Minus One (FMO) controls to próbki barwione wszystkimi fluoroforami w panelu, minus jeden z nich. Są one używane do Ustawienia górnej granicy sygnału tła na pominiętej etykiecie, a tym samym do identyfikacji i bramkowania pozytywnych populacji w eksperymentach wielokolorowych. FMO mają kluczowe znaczenie, gdy pozytywy nie są wyraźnie oddzielone od negatywów ze względu na niski lub zmienny poziom ekspresji (populacja jest przyciemniona lub rozmazana). Ogólnie zaleca się włączenie FMO dla każdego markera podczas testowania i optymalizacji nowego wielokolorowego panelu przeciwciała. Po prawidłowej walidacji panelu niektóre z FMO mogą zostać odrzucone, a tylko te dla trudnych do zdobycia populacji są następnie uruchamiane z każdą partią w pełni poplamionych próbek.

FMO są bardziej dokładnymi kontrolami bramkowania niż próbki nieutwardzone lub pojedyncze poplamione, ponieważ uwzględniają rozszerzenie populacji ujemnych z powodu rozprzestrzeniania się rozlewu (patrz Kontrola kompensacji). FMO nie kontrolują jednak specyficznego wiązania przeciwciał (patrz blok Fc i miareczkowanie Ab) lub nieistotnego podstawowego poziomu ekspresji (patrz kontrola biologiczna). Co ważne, na kontrolę FMO wpływa zarówno autofluorescencja, jak i wtórny poziom ekspresji markera w komórkach i dlatego muszą być to komórki tego samego typu niż próbki doświadczalne i nie mogą być zastąpione np. perełkami lub nieistotną linią komórkową.

FMO

rys. 1. Negatywne populacje PE wykazują zwiększoną rozpiętość danych w wielokolorowym panelu i wymagają kontroli FMO dla dokładnego bramkowania pozytywnych populacji.

dodatkowe informacje:
  • Bio-Rad Flow cytometry Basics Guide: Fluorescent Minus One Controls
  • FMO article at BiteSizeBio

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *