IMM

FMO Controls

fluorescența minus unu (FMO) controls sunt probe colorate cu toate fluoroforii din panoul dvs., minus unul dintre ele. Acestea sunt folosite pentru a seta limita superioară pentru semnalul de fundal pe eticheta omisă și, astfel, pentru a identifica și a purta populațiile pozitive în experimentele multicolore. FMOs sunt cruciale atunci când pozitivele nu sunt clar separate de negative datorită nivelului de Expresie scăzut sau variabil (populația este slabă sau un frotiu). În general, se recomandă includerea FMOs pentru fiecare marker atunci când se testează și se optimizează un nou panou de anticorpi multicolori. Odată ce panoul este validat în mod corespunzător, unele dintre FMOs ar putea fi abandonate și numai cele pentru populațiile dificil de poartă sunt ulterior rulate cu fiecare lot de probe complet colorate.

FMOs sunt controale de închidere mai precise decât probele nepătate sau colorate singure, deoarece iau în considerare lărgirea populațiilor negative din cauza răspândirii spillover (a se vedea controalele de compensare). Cu toate acestea, FMOs nu controlează legarea nespecifică a anticorpilor (vezi titrarea blocului Fc și Ab) sau nivelul de Expresie bazală neglijabil (vezi controalele biologice). Important, controalele FMO sunt afectate atât de autofluorescență, cât și de nivelurile de expresie a markerului secundar din celule și, prin urmare, trebuie să fie același tip de celule decât probele experimentale și nu pot fi înlocuite de ex.margele sau o linie celulară irelevantă.

FMO

Fig. 1. Populațiile negative pe prezintă o răspândire crescută a datelor în panoul multicolor și necesită un control FMO pentru o închidere precisă a populațiilor pozitive.

informații suplimentare:
  • Bio-Rad Flow Citometry Basics ghid: Fluorescent Minus One Controls
  • FMO articol la BiteSizeBio

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *