IMM

FMO-kontroller

fluorescens Minus en (FMO) kontroller är prover färgade med alla fluoroforer i din panel, minus en av dem. De används för att ställa in den övre gränsen för bakgrundssignal på den utelämnade etiketten och därmed identifiera och gate positiva populationer i mångfärgade experiment. FMO är avgörande när de positiva inte är tydligt separerade från negativen på grund av låg eller variabel uttrycksnivå (populationen är svag eller smet). Det rekommenderas generellt att inkludera FMOs för varje markör vid testning och optimering av en ny flerfärgad antikroppspanel. När panelen är korrekt validerad kan några av FMO: erna tappas och endast de för svåra att gate populationer körs därefter med varje parti helt färgade prover.

FMOs är mer exakta grindkontroller än ofärgade eller enstaka färgade prover eftersom de tar hänsyn till utvidgningen av negativa populationer på grund av spridning av spridning (se kompensationskontroller). FMOs kontrollerar emellertid inte för ospecifik antikroppsbindning (se Fc-block och Ab-titrering) eller icke försumbar basal expressionsnivå (se biologiska kontroller). Viktigt är att FMO-kontroller påverkas av både autofluorescens och sekundära marköruttrycksnivåer i cellerna och måste därför vara samma typ av celler än de experimentella proverna och kan inte ersättas med t.ex. pärlor eller en irrelevant cellinje.

FMO

Fig. 1. PE-negativa populationer visar ökad dataspridning i flerfärgad panel och kräver en FMO-kontroll för exakt gating av positiva populationer.

ytterligare Information:
  • Bio-Rad Flow Cytometry Basics Guide: fluorescerande Minus en kontroller
  • FMO artikel på BiteSizeBio

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras. Obligatoriska fält är märkta *